论文《厚朴姜制前后化学成分探讨》-仁创编译转载

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　　摘要：目的比较厚朴姜制前后化学成分变化，分析不同姜制方法对厚朴化学成分的影响，为其临床应用提供参考依据。方法采用高效液相色谱法(HPLC)测定厚朴酚与和厚朴酚含量，《中国药典》四部附录挥发油测定法甲法测定挥发油含量，可见分光光度法(UV)测定多糖及鞣质的含量，并采用多重比较进行统计分析。结果与厚朴生品比较，4种姜制品中的厚朴酚、和厚朴酚、鞣质含量均有不同程度的增加，且与厚朴生品之间差异均有统计学意义(P<0.05);姜炙品、姜煮品与生姜紫苏制品中的挥发油和多糖含量均降低，姜浸品则明显升高，且4种厚朴姜制品中除生姜紫苏制品的挥发油含量变化不明显，其他3种姜制品的多糖与挥发油含量较生品差异均有统计学意义(P<0.05)。4种厚朴姜制品中的5种成分含量两两比较，差异均有统计学意义(P<0.05)。姜炙品和姜煮品的各类成分变化趋势一致。结论厚朴姜制前后多种化学成分发生了不同程度的改变;厚朴姜炙品和姜煮品在临床上可作为同一种炮制品应用，而厚朴姜浸品和生姜紫苏制品炮制后药性变化及功效具有何特点尚需进一步研究。

　　关键词：厚朴;炮制;厚朴酚;和厚朴酚;挥发油;多糖;鞣质

　　厚朴始载于《神农本草经》，被列为中品[1]，是常用的芳香化湿药，为木兰科植物厚朴MagnoliaofficinalisRehd.etWils.或凹叶厚朴MagnoliaofficinalisRehd.etWils.Var.bilobaRehd.etWils.的干燥干皮、枝皮及根皮[2]。厚朴的主要化学成分有木脂素类、挥发油、生物碱等[3]，其中以厚朴酚与和厚朴酚为主的木脂素类活性成分约占主要化学成分的5%，有研究表明厚朴酚与和厚朴酚为厚朴中最主要的活性物质，可用于治疗神经、心血管、消化、呼吸等系统的相关疾病[4]。挥发油含有量约为1%，具有杀菌、镇静、驱风健胃等药理作用[5]。有学者[6]研究发现厚朴中还含有多糖、鞣质类成分。目前厚朴炮制前后化学成分的研究[7-11]主要集中在厚朴酚与和厚朴酚的含量检测，2015年版《中国药典》对厚朴饮片质量的控制指标也为厚朴酚与和厚朴酚的总量。厚朴姜制法历史悠久。《雷公炮炙论》始载姜炙法;此后，历代还出现了姜煮焙法、姜枣制法、土姜酒制法、姜淹法等炮制方法。2015年版《中国药典》及全国各省市炮制规范中收载的厚朴炮制方法主要以姜炙法为主，此外还有姜浸法[12]、姜煮法[13]、生姜紫苏制[14]等姜制方法，其功效与主治均未作区分，统一表述为：燥湿消痰、下气除满，用于湿滞伤中、脘痞吐泻、食积气滞、腹胀便秘、痰饮喘咳。宋代《本草衍义》指出厚朴“不以姜制，则棘人喉舌”[15]，现认为厚朴生品辛辣峻烈，对咽喉有强烈的刺激性，一般不生用;厚朴姜制后不仅可以缓和刺激性，还能增强宽中和胃的作用，故临床多用其炮制品。4种姜制厚朴的功效与主治均未作区分，提示其物质基础变化规律应相似。本文拟通过比较现行《中国药典》和地方炮制规范收载的4种厚朴姜制品中酚类、挥发油、多糖及鞣质等化学成分含量，从多种化学成分含量的变化角度探究不同的厚朴姜制方法物质基础变化规律是否一致，为厚朴特色炮制方法的传承、临床应用的安全有效及炮制原理的探讨提供参考依据。

　　1材料

　　1.1仪器

　　Waters2695高效液相色谱仪[2695四元梯度泵，2489紫外检测器，Empower色谱工作站，谱质分析检测技术(上海)有限公司];TU1810紫外-可见分光光度计(普析通用公司);SB25-12DTDN型超声波清洗器(宁波新芝生物科技股份有限公司);SHB-3型循环多用真空泵(郑州长城科工贸有限公司);ZDHW型电热套(北京中兴伟业仪器有限公司);HH-S6型电热恒温水浴锅(北京科伟永兴仪器有限公司);多功能电热5型家用炒药机(迈斯机械制造有限公司);电陶炉(SKG中国有限公司);AR882+型在线式红外测温仪(深圳市富兰克仪器仪表有限公司);PL2002电子天平(梅特勒-托利多仪器上海有限公司);BT-25S电子分析天平、BS210S电子分析天平(北京赛多利斯仪器有限公司)。

　　1.2试药

　　厚朴药材(批号：E20170701，产地：四川，湖北金贵中药饮片有限公司，经北京中医药大学杨瑶珺教授鉴定为木兰科植物厚朴MagnoliaofficinalisRehd.etWils.的干燥干皮);紫苏[批号：20170223，产地：江苏，北京本草方源药业集团有限公司，经北京中医药大学杨瑶珺教授鉴定为唇形科植物紫苏Perillafrutescens(L.)Britt.的干燥叶];生姜购自农贸市场;厚朴酚、和厚朴酚、无水葡萄糖、没食子酸对照品(批号分别为：B20511、B20498、B21882、B20851，上海源叶生物科技有限公司，纯度均≥98%);乙腈为色谱纯(德国Merck公司);浓硫酸、苯酚、钨酸钠、钼酸钠、硫酸锂、干酪素等其他试剂均为分析纯(北京化工厂);纯净水(杭州娃哈哈集团有限公司)。

　　2方法

　　2.1辅料姜汁的制备

　　按照2015年版《中国药典》四部(0213炮制通则)所载方法制备[16]。将生姜洗净，捣烂，加水适量，压榨取汁，姜渣再加水适量重复压榨一次，合并汁液，即为“姜汁”。姜汁与生姜的比例为1∶1。

　　2.2厚朴炮制品的制备

　　2.2.1生品[1]刮去粗皮，洗净，润透，切丝，干燥后备用。2.2.2姜炙品[2]将厚朴生品饮片与姜汁拌匀闷润，至姜汁吸尽，置于锅内，文火炒干，取出，放凉，备用。每100kg厚朴用生姜10kg。2.2.3姜浸品[12]取厚朴生品饮片，用姜汁拌匀，闷润至姜汁吸尽，干燥(不超过60℃)。每100kg厚朴用生姜10kg。2.2.4姜煮品[13]取生姜切片，加水与净厚朴同煮至汁水尽(加水量以没过饮片为宜)，取出厚朴，切丝，干燥(不超过60℃)。每100kg厚朴用生姜10kg。2.2.5生姜紫苏制品[14]取净厚朴，置锅内，加生姜片、紫苏与水同煮(加水量以没过饮片为宜)，至药汁几尽，取出，切丝，晒至7～8成干，将剩余药汁拌入，使之吸尽，晒或低温干燥，筛去灰屑。每100kg厚朴用生姜10kg，紫苏5kg。每种炮制品平行炮制3份。将上述炮制品粉碎，过筛备用。

　　2.3厚朴炮制品中厚朴酚、和厚朴酚的含量测定[17]

　　2.3.1色谱条件AgilentZORBAXEclipseXDB-C18色谱柱(4.6mm×250mm，5µm)，流动相为A：0.1%磷酸水，B：乙腈，梯度洗脱(0～5min，5%～15%B;5～20min，15%～18%B;20～30min，18%～50%B;30～60min，50%～70%B;60～70min，70%～95%B;70～80min，95%～95%B;80～90min，95%～5%B);检测波长254nm;柱温40℃;流速0.8mL·min-1;进样量10µL。2.3.2对照品溶液的制备分别精密称取和厚朴酚、厚朴酚对照品3.37、4.51mg置于25mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，用0.45µm微孔滤膜滤过，即得厚朴酚与和厚朴酚的混合对照品溶液。2.3.3供试品溶液的制备精密称取厚朴饮片粉末(过三号筛)约0.1g，置100mL具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25mL，摇匀，密塞，称重，超声处理20min(600W，40Hz)，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，经0.45µm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得供试品溶液。2.3.4方法学考察精密吸取和厚朴酚、厚朴酚混合对照品溶液0.1、0.5、1.0、2.0、3.0mL，分别置于25mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取混合对照品溶液及上述稀释后的混合对照品溶液各10µL，注入液相色谱仪，测定，以峰面积为纵坐标(Y)，和厚朴酚、厚朴酚对照品浓度为横坐标(X)进行线性回归绘制标准曲线。和厚朴酚回归方程为Y=3.68×104X+1.7×104，r=1.000，厚朴酚回归方程为Y=1.6×104X+1.4×103，r=1.000，结果表明和厚朴酚进样量在0.005～134.8µg，厚朴酚在0.0072～180.4µg与峰面积呈良好的线性关系。取厚朴生品饮片1份，按照“2.3.3”项下方法制备供试品溶液，进行精密度和稳定性考察。结果和厚朴酚、厚朴酚的精密度试验RSD分别为0.082%和0.13%，表明仪器精密度良好;稳定性试验RSD分别为0.43%和0.72%，表明供试品溶液在24h内稳定。取厚朴生品饮片6份，分别按照“2.3.3”项下方法制备供试品溶液，进行重复性和加样回收试验考察。结果和厚朴酚、厚朴酚的重复性试验RSD分别为1.2%和1.8%，表明该方法重复性良好;和厚朴酚平均回收率为101.7%，RSD为2.6%，厚朴酚平均回收率为103.3%，RSD为1.4%。2.3.5含量测定取厚朴生品饮片及不同炮制品，按照“2.3.3”项下方法制备供试品溶液，按照“2.3.1”项下条件测定，计算样品含量，结果见表1。厚朴高效液相色谱图见图1。

　　2.4厚朴炮制品中挥发油的含量测定

　　按2015年版《中国药典》四部(通则2204)挥发油测定法甲法[16]进行测定。分别称取厚朴生品及其炮制品粗粉(过二号筛)100g，精密称定，置烧瓶中，加7倍量水浸泡过夜，加热并保持微沸状态，以水蒸气蒸馏法提取8h，至挥发油量不再增加，停止加热，放置片刻，开启测定器下端的活塞，将水缓缓放出，至油层上端到达刻度0线上面5mm处为止，放置1h以上，再开启活塞使油层下降至其上端恰与刻度0线平齐，读取挥发油量，并计算供试品中挥发油的含量。结果见表1。

　　2.5厚朴炮制品中多糖的含量测定[16]

　　2.5.1对照品溶液的制备精密称取经105℃干燥至恒重的无水葡萄糖28.96mg，置50mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液。2.5.2供试品溶液的制备取厚朴生品及其炮制品粉末(过三号筛)各0.5g，精密称定，置锥形瓶中，精密加水50mL，称定重量，加热回流提取1h，取出放冷，再次称定重量，用水补足减失重量，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液5mL，置50mL量瓶中，用水定容，摇匀，即得。2.5.3测定方法精密吸取“2.5.2”项下供试品溶液各1.0mL，加入5%的苯酚0.6mL，摇匀，精密加入浓硫酸4mL，混匀，置沸水浴中加热10min，取出，冷水中冷却5min，取出。以相应试剂为空白对照，在490nm波长处测定吸光度，计算多糖含量。2.5.4方法学考察精密吸取“2.5.1”项下对照品溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8mL，分别置于10mL试管中，各加水至1.0mL，按“2.5.3”项下方法测定，以吸光度为纵坐标(Y)，葡萄糖浓度为横坐标(X)，绘制标准曲线。线性方程为Y=2.2468X+0.0241，r=0.9994，结果表明多糖含量在0.058～0.463mg·mL-1吸光度呈良好的线性关系。取厚朴生品饮片1份，按照“2.5.2”项下方法制备供试品溶液，进行精密度和稳定性考察。结果精密度试验RSD为0.27%，表明仪器精密度良好;稳定性试验RSD为0.27%，表明供试品溶液在5h内稳定。取厚朴生品饮片6份，分别按照“2.5.2”项下方法制备供试品溶液，进行重复性和加样回收试验考察。结果重复性试验RSD为0.55%，表明该方法重复性良好;加样回收试验平均回收率为101.4%，RSD为2.5%。2.5.5含量测定取厚朴生品饮片及不同炮制品，按照“2.5.2”项下方法制备供试品溶液，按照“2.5.3”项下条件测定，计算样品多糖含量，结果见表1。

　　2.6厚朴炮制品中鞣质的含量测定

　　取厚朴生品饮片及不同炮制品粉末(过三号筛)约0.5g，精密称定，照2015年版《中国药典》四部(通则2202)鞣质含量测定法[16]测定，在“不被吸附的酚”测定中，同时作空白试验校正，计算，即得。结果见表1。

　　3结果与分析

　　4种厚朴炮制品中厚朴酚、和厚朴酚、挥发油、多糖及鞣质含量测定结果见表1。由表1可以看出，厚朴4种姜制品中厚朴酚、和厚朴酚及鞣质含量较生品均有不同程度的升高。厚朴姜浸品的挥发油与多糖含量高于生品饮片，而其他3种姜制品含量均降低。厚朴酚与和厚朴酚2种酚类成分含量排序为：姜煮品>姜炙品>姜浸品>生姜紫苏制品>生品;鞣质含量排序为：姜煮品>生姜紫苏制品>姜炙品>姜浸品>生品;挥发油含量排序为：姜浸品>生品>生姜紫苏制品>姜炙品>姜煮品;多糖含量排序为：姜浸品>生品>姜炙品>生姜紫苏制品>姜煮品。4种厚朴姜制品的厚朴酚、和厚朴酚、多糖、鞣质含量与生品之间差异均有统计学意义(P<0.05);生姜紫苏制品的挥发油含量与厚朴生品差异不明显(P>0.05)，其余3种厚朴姜制品的挥发油含量与生品之间差异均有统计学意义(P<0.05);4种厚朴姜制品之间的5种成分含量两两比较，差异均有统计学意义(P<0.05)。

　　4讨论

　　厚朴姜制后酚类、挥发油、鞣质、多糖等成分的含量均较生品有变化，但姜浸、姜煮、姜炙、生姜紫苏制品在各类成分中的含量高低顺序不完全一致，可能与是否加热、炙炒还是煮制、煮制时的加水量、切丝后姜炙还是姜煮后切丝等操作方法不同以及所加辅料不同有关。厚朴姜炙品和姜煮品的5种化学成分含量与生厚朴比较，挥发油和多糖含量降低，其他成分含量增加，两者变化规律一致，仅变化幅度有差异。有学者研究发现厚朴酚与和厚朴酚具有抗腹泻的药理作用[18]，和厚朴酚具有下调幽门螺旋杆菌毒性的潜在作用[19]，厚朴经炮制后2种酚类成分含量均升高，可能与其姜制后可增强宽中和胃作用的功效有关。姜炙、姜煮品挥发油含量较厚朴生品明显降低，本课题组采用气-质联用法研究发现[20]，厚朴姜制除了某些挥发性成分的相对含量发生变化外，还新增或消失了某些成分，如姜炙品、姜煮品与生厚朴相比，长叶蒎烯、丁香烯醇、Equilenin3种成分均消失，而姜浸品中这3种成分未消失。有研究[21]证实厚朴生用有刺激性，姜炙后刺激性减弱。鉴于厚朴姜炙品和姜煮品挥发油含量较生品降低，且有挥发性成分消失，这些成分的量变和质变可能与其刺激性减弱有关。提示厚朴姜炙与姜煮后的药性变化可能一致，均能缓和刺激性，增强宽中和胃的功效。而厚朴姜浸品中挥发油含量较生品有所增加，多糖与鞣质含量也与姜炙品、姜煮品的变化趋势相反;生姜紫苏制品中挥发油含量与生品相比变化不明显，且加入了紫苏作辅料，有可能产生新的成分;与姜炙品、姜煮品的物质基础变化规律相比，这两种炮制品均有其特殊性，其炮制后药性变化及临床应用中是否有不同于姜炙品、姜煮品的特色之处，值得进一步研究。综上所述，不同的姜制方法对厚朴成分的影响不同。从炮制前后物质基础变化的角度分析，厚朴姜炙品和姜煮品炮制后功效的改变可能与传统认为的“厚朴姜制刺激性降低，且增强宽中和胃的作用”一致，两者在临床上可作为同一种炮制品应用;厚朴姜浸品和生姜紫苏制品的各类成分变化规律有其特殊性，其炮制后药性变化及功效具有何特点有待进一步研究。

　　作者：刘娜 袁金凤 谢登香 柴冲冲 王靖越 李欣欣 张凯 尹贻慧 魏龙吟 陈冬玲 李飞 单位：北京中医药大学中药学院

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