论文《白花鬼针草乙酸乙酯部位化学成分研究》-仁创编译转载

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　　摘要目的:研究闽产白花鬼针草乙酸乙酯部位化学成分。方法:以硅胶色谱、SephadexLH-20色谱及C18反相硅胶色谱分离纯化乙酸乙酯部位的化学成分，以1H-NMR、13C-NMR以及质谱鉴定化学结构。结果:从白花鬼针草乙酸乙酯部位分离、纯化、鉴定了6个黄酮类化合物，分别为:3，3'-二甲氧基槲皮素(1)、2'-羟基-4，4'-二甲氧基查耳酮(2)、山奈酚(3)、槲皮素-3-甲氧基-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(4)、槲皮素-3，3'-二甲氧基-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(5)、奥卡宁4'-O-β-D-(2″，4″，6″-三乙酰基)-吡喃葡萄糖苷(6)。结论:6个化合物均首次从白花鬼针草中分离得到，其中，3，3'-二甲氧基槲皮素(1)、槲皮素-3-甲氧基-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(4)、槲皮素-3，3'-二甲氧基-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(5)3个化合物属于首次从鬼针草属药用植物中分离鉴定。

　　关键词:白花鬼针草;化学成分;3，3'-二甲氧基槲皮素

　　白花鬼针草Bidenspilosavar.radiataSchult.Bip.为菊科植物白花鬼针草的全草，分布华东、中南及西南等地，具有清热解毒、利湿退黄、散瘀活血的功效，主治感冒发热、风湿痹痛、湿热黄疸、痈肿疮疖[1]，体外抗肿瘤活性研究显示白花鬼针草乙酸乙酯部位具有显著抗结肠癌活性[2]。有学者从白花鬼针草中分离鉴定了10个化学成分，主要为甾醇类与烷酸类化合物[3]，但对其化学成分研究还有待完善与系统化，故本课题组针对白花鬼针草乙酸乙酯部位进行成分研究，为阐明白花鬼针抗结肠癌的活性成分奠定基础。

　　1仪器与材料

　　1.1仪器TX100型多功能提取浓缩机组(武汉中大制药设备有限公司);RE-2000旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂);DLSB-5/20低温冷却循环泵(郑州长城科工贸有限公司);酒精密度计(北京森赛密度计公司);DK-420型电热恒温水槽(上海精宏实验设备有限公司);MSFinniganTraceDSQ四极杆质谱仪;硅胶(青岛海洋化工厂)。1.2试药白花鬼针草采自福建省永春县牛姆林，经福建中医药大学药学院杨成梓副教授鉴定为菊科植物鬼针草属白花鬼针草BidenspilosaL.var.radiataSchult.Bip.的全草;乙醇、石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇均为分析纯(上海国药集团化学试剂有限公司);蒸馏水。

　　2方法与结果

　　2.1白花鬼针草醇提物及各极性部位的制备称取干燥白花鬼针草10kg，切碎，置于TX100型多功能提取浓缩机组提取罐中，以75%的乙醇浸泡过夜后90℃加压提取2次，合并提取液并过滤，减压浓缩，得到白花鬼针草的乙醇总提取物。乙醇总提取物以水充分混悬后，按体积1∶1(乙醇提取物的水溶液:萃取溶剂)依次经过石油醚、乙酸乙酯、正丁醇分别萃取3次，分别合并萃取液并浓缩，60℃水浴槽上干燥至恒重，得到白花鬼针草醇提物(TE-BP)、石油醚部位(PE-BP)、乙酸乙酯部位(EE-BP)、正丁醇部位(BE-BP)及水部位(WE-BP)等5个不同的极性部位的浸膏白花鬼针草TE-BP浸膏重1033g，PE-BP重127g，EE-BP重135g，BE-BP重208g，WE-BP重547g。以W生药(g)表示白花鬼针草干生药的重量，W部位(g)表示白花鬼针草乙醇总提取物或不同极性部位的重量，乙醇总提取物或不同极性部位的得率按公式2-1计算:按公式2-1计算得出乙醇总提取物及不同极性部位的得率依次为10.33%，1.27%，1.35%，2.08%，5.47%。2.2乙酸乙酯部位化学成分的纯化及鉴定取EE-BP浸膏90g，硅胶柱正相色谱，石油醚∶乙酸乙酯梯度洗脱，合并石油醚∶乙酸乙酯不同梯度(3∶1、2∶1、1∶1)洗脱流份，浓缩得浸膏30g，再进行硅胶柱正相色谱，氯仿∶甲醇梯度洗脱，合并氯仿∶甲醇不同梯度(10∶1、5∶1、2∶1)及甲醇洗脱流份，浓缩物再进行硅胶正相色谱，乙酸乙酯洗脱，再反复经SephadexLH-20柱以及C18反相硅胶柱分离，得到的化合物经1H-NMR、13C-NMR以及质谱鉴定其化学结构。结果从EE-BP中分离、纯化得到6个化合物，结构均已鉴定，全属于黄酮类化合物，具体鉴定情况如下。(1)化合物1:3，3'-二甲氧基槲皮素。黄色针晶(甲醇);mp210～212℃;UVλmax(甲醇)nm:268，360;ESI-MSm/z329[M-H]-，353[M+Na]+;1H-NMR(DMSO-d6，400MHz)δ(ppm)，3.79(3H，s，OCH3-3)，12.67(1H，s，OH-5)，6.20(1H，d，J=2.0Hz，H-6)，10.85(1H，s，OH-7)，6.43(1H，d，J=2.1Hz，H-8)，7.56(1H，d，J=2.2Hz，H-2')，3.86(1H，s，OCH3-3')，9.43(1H，s，OH-4')，7.10(1H，d，J=8.3Hz，H-5')，7.54(1H，dd，J=1.75，8.4Hz，H-6');13C-NMR(DMSO-d6，100MHz)δ(ppm)，155.2(C-2)，138.0(C-3)，59.7(OCH3-3)，177.9(C-4)，161.2(C-5)，93.6(C-6)，164.2(C-7)，98.6(C-8)，156.3(C-9)，104.2(C-10)，122.2(C-1')，111.9(C-2')，150.2(C-3')，55.6(OCH3-3')，146.3(C-4')，114.9(C-5')，120.3(C-6')。以上波谱数据与文献[4]报道基本一致，故化合物1鉴定为3，3'-二甲氧基槲皮素，结构式见图1。(2)化合物2:6'-羟基-4，4'-二甲氧基查耳酮。黄色针状晶体(甲醇);13CNMR(DMSO-d6，100MHz)δ(ppm)，55.4(OCH3-6)，55.7(OCH3-4')，100.9(C-6)，107.3(C-5)，11基本3.8(C-9)，114.4(C-3'，5')，118.6(C-2)，127.2(C-1')，131.1(C-2'，6')，132.5(C-9)，144.2(C-1)，161.6(C-4')，165.7(C-7)，165.8(C-4)，191.9(C-3)，以上波谱数据与文献[5，6]报道一致，故化合物2鉴定为6'-羟基-4，4'-二甲氧基查耳酮，结构式见图2。(3)化合物3:山奈酚。黄色粉末，mp274～275℃，相对分子质量286，分子式为C15H10O6，易溶于甲醇，EI-MSm/z:285[MH]+(100)，286[M]+(15)，1H-NMR(400MHz，CD3OD)δ(ppm):12.45(1H，s，H-5)，8.07(2H，d，J=8.7Hz，H-2'，6')，6.89(2H，d，J=8.7Hz，H-3'，5')，6.40(1H，d，J=2.2Hz，H-8)，6.28(1H，d，J=2.2Hz，H-6)。13C-NMR(100MHz，CD3OD):148.4(C-2)，137.5(C-3)，177.7(C-4)，162.8(C-5)，99.6(C-6)，165.5(C-7)，94.8(C-8)，158.6(C-9)，104.1(C-10)，121.8(C-1')，131.0(C-2'，6')，115.0(C-3'，5')，160.7(C-4')。以上波谱数据与文献[7]报道基本一致，故化合物3鉴定为山奈酚，结构式见图3。(4)化合物4:槲皮素-3-甲氧基-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。淡黄色放射状晶体，相对分子质量为478，分子式C22H22012，溶于甲醇，EI-MSm/z479[M+H]+;1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ(ppm):7.58(1H，d，J=2.1Hz，H-2')，7.48(1H，dd，J=2.1Hz，8.6Hz，H-6')，6.93(1H，d，J=8.6Hz，H-5')，6.76(1H，d，J=2.0Hz，H-8)6.44(1H，d，J=2.1Hz，H-6)，3.80(3H，s，OMe)，5.55(1H，d，J=7.6Hz，glu-1=-H-1″)，4.58(1H，dd，J=1.5Hz，3.48Hz，H-3″)，4.63(1H，dd，J=1.5Hz，11.8Hz，H-6″)。13C-NMR(100MHz，DMSO-d6):156.4(C-2)，138.4(C-3)，178.6(C-4)，161.4(C-5)，99.7(C-6)，163.4(C-7)，94.9(C-8)，156.7(C-9)，106.3(C-10)，121.4(C-1')，116.2(C-2')，145.7(C-3')，149.3(C-4')，116.1(C-5')，121.0(C-6')，60.2(OCH3)，100.3(C-1″)，73.6(C-2″)，76.8(C-3″)，70.0(C-4″)，76.8(C-5″)，69.9(C-6″)。以上波谱数据与文献[8]报道基本一致，故化合物4鉴定为槲皮素-3-甲氧基-7-0-β-D-吡喃葡萄糖苷，结构式见图4。(5)化合物5:槲皮素-3，3'-二甲氧基-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。淡黄色放射状晶体，相对分子质量为492，分子式C23H24012，溶于甲醇，EI-MSm/z493[M+H]+;1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ(ppm):7.58(1H，d，J=2.1Hz，H-2')，7.48(1H，dd，J=2.1Hz，8.6Hz，H-6')，6.93(1H，d，J=8.6Hz，H-5')，6.76(1H，d，J=2.0Hz，H-8)，6.44(1H，d，J=2.1Hz，H-6)，3.80(3H，s，OMe)，3.95(3H，s，OMe)，5.55(1H，d，J=7.6Hz，glu1=-H-1″)，4.58(1H，dd，J=1.5Hz，3.48Hz，H-3″)，4.63(1H，dd，J=1.5Hz，11.8Hz，H-6″)。13C-NMR(100MHz，DMSO-d6):156.4(C-2)，138.4(C-3)，178.6(C-4)，161.4(C-5)，99.7(C-6)，163.4(C-7)，94.9(C-8)，156.7(C-9)，106.3(C-10)，121.4(C-1')，116.2(C-2')，145.7(C-3')，149.3(C-4')，116.1(C-5')，121.0(C-6')，60.2(OCH3)，100.3(C-1″)，73.6(C-2″)，76.8(C-3″)，70.0(C-4″)，76.8(C-5″)，69.9(C-6″)。以上波谱数据与文献[9]报道基本一致，故化合物5鉴定为槲皮素-3，3'-二甲氧基-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷，结构式见图5。(6)化合物6:奥卡宁4'-O-β-D-(2″，4″，5″-三乙酰基)-吡喃葡萄糖苷。淡黄色粉末(甲醇)，相对分子质量为576，分子式C27H26O4，溶于甲醇，EI-MSm/z:576[M]+，1H-NMR(DMSO-d6)δ(ppm):7.59(1H，d，J=9.0Hz，H-6')，6.79(1H，d，J=9.0Hz，H-5')7.14(1H，d，J=1.5Hz，H-2)，7.11(1H，dd，J=1.5Hz，8.0Hz，H-6)，6.79(1H，d，J=8.0Hz，H-5)，7.59(1H，d，J=16.5Hz，H-β)，7.58(1H，d，J=16.5Hz，H-α);糖上质子信号:5.43(1H，d，J=7.0Hz，H-1″)，5.41(1H，dd，J=9.0Hz，10.0Hz)，4.62(1H，dd，J=10.0Hz，10.0Hz)，4.22(2H，m)，3.87(1H，m)，3.70(1H，dd，J=9.0Hz，10.0Hz);2.05、2.02、1.94(3H，s，-COCH3×3);13C-NMR(DMSO-d6)δ:192.7(C-4)，170.0，169.6，169.3(-OAc×3)，152.6(C-2')，150.0(C-4')，149.2(C-4)，145.6(C-3)，145.5(C-β)，134.5(C-3')，126.1(C-1)，122.6(C-6)，121.3(C-6')，117.5(C-α)，115.9(C-5)，115.7(C-2)，106.1(C-5')，99.5(C-1″)，74.0(C-2″)，70.8(C-5″)，70.8(C-3″)，68.33(C-4″)，61.73(C-6″)，20.59，20.51，20.39(-CH3×3)。以上波谱数据与文献[10]报道基本一致，故化合物6鉴定为奥卡宁4'-O-β-D-(2″，4″，5″-三乙酰基)-吡喃葡萄糖苷，结构式见图6。

　　3讨论

　　目前，从鬼针草属药用植物中至少已分离鉴定了110个化合物，大多以黄酮类化合物为主[11]。本课题组研究结果显示，从白花鬼针草乙酸乙酯部位分离得到的化合物类别来看，也是以黄酮化合物数量居多，这提示白花鬼针草乙酸乙酯部位所含化学成分以黄酮类化合物为主。现有文献显示，黄酮类化合物槲皮素或槲皮素类似物具有良好的体外抗肿瘤活性[12]，本研究结果显示，白花鬼针草乙酸乙酯部位含有3，3'-二甲氧基槲皮素、槲皮素-3-甲氧基-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、槲皮素-3，3'-二甲氧基-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷3个槲皮素类似物，这提示白花鬼针草体外抗结肠癌活性成分可能为槲皮素类化合物。

　　作者：万仲贤 徐元翠 吴飞 郑良栋 覃鸿恩 吴锦忠 单位：恩施土家族苗族自治州中心医院药剂科 福建中医药大学中西医结合研究院

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